Gen kháng Carbapenem (KPC/NDM/OXA 48/OXA 23/VIM/IMP)
Tên sản phẩm
Bộ kit phát hiện gen kháng Carbapenem HWTS-OT045 (KPC/NDM/OXA 48/OXA 23/VIM/IMP) (PCR huỳnh quang)
Dịch tễ học
Kháng sinh Carbapenem là nhóm kháng sinh β-lactam không điển hình với phổ kháng khuẩn rộng nhất và hoạt tính kháng khuẩn mạnh nhất. Nhờ tính ổn định đối với β-lactamase và độc tính thấp, nó đã trở thành một trong những loại thuốc kháng khuẩn quan trọng nhất để điều trị các bệnh nhiễm trùng do vi khuẩn nặng. Carbapenem có tính ổn định cao đối với các β-lactamase phổ rộng (ESBL) do plasmid truyền, nhiễm sắc thể và các cephalosporinase (enzyme AmpC) do plasmid truyền.
Kênh
| Hỗn hợp PCR 1 | Hỗn hợp PCR 2 | |
| FAM | IMP | VIM |
| VIC/HEX | Kiểm soát nội bộ | Kiểm soát nội bộ |
| CY5 | NDM | KPC |
| ROX | OXA48
| OXA23 |
Thông số kỹ thuật
| Kho | ≤-18℃ |
| Hạn sử dụng | 12 tháng |
| Loại mẫu vật | Đờm, khuẩn lạc thuần chủng, dịch ngoáy trực tràng |
| Ct | ≤36 |
| CV | ≤5,0% |
| LoD | 103CFU/mL |
| Tính đặc hiệu | a) Bộ kit phát hiện các mẫu đối chứng âm tính tiêu chuẩn của công ty và kết quả đáp ứng các yêu cầu của các mẫu đối chứng tương ứng. b) Kết quả xét nghiệm phản ứng chéo cho thấy bộ kit này không có phản ứng chéo với các tác nhân gây bệnh đường hô hấp khác, chẳng hạn như Klebsiella pneumoniae, Acinetobacter baumannii, Pseudomonas aeruginosa, Streptococcus pneumoniae, Neisseria meningitidis, Staphylococcus aureus, Klebsiella oxytoca, Haemophilus influenzae, Acinetobacter junii, Acinetobacter haemolyticus, Legionella pneumophila, Escherichia coli, Pseudomonas fluorescens, Candida albicans, Chlamydia pneumoniae, Adenovirus đường hô hấp, Enterococcus, hoặc các mẫu chứa các gen kháng thuốc khác như CTX, mecA, SME, SHV, TEM, v.v. c) Chống nhiễu: Mucin, Minocycline, Gentamicin, Clindamycin, Imipenem, Cefoperazone, Meropenem, Ciprofloxacin Hydrochloride, Levofloxacin, Axit Clavulanic, Roxithromycin được chọn để thử nghiệm nhiễu, và kết quả cho thấy các chất gây nhiễu nêu trên không có phản ứng gây nhiễu đối với việc phát hiện các gen kháng carbapenem KPC, NDM, OXA48, OXA23, VIM và IMP. |
| Các công cụ áp dụng | Hệ thống PCR thời gian thực Applied Biosystems 7500 Hệ thống PCR thời gian thực QuantStudio®5 Hệ thống PCR thời gian thực SLAN-96P (Công ty TNHH Công nghệ Y tế Hongshi) Hệ thống PCR thời gian thực LightCycler®480 Hệ thống phát hiện PCR thời gian thực LineGene 9600 Plus (FQD-96A，Hàng ChâuCông nghệ sinh học) Máy chu trình nhiệt định lượng thời gian thực MA-6000 (Công ty TNHH Molarray Tô Châu) Hệ thống PCR thời gian thực BioRad CFX96 Hệ thống PCR thời gian thực BioRad CFX Opus 96 |
Quy trình làm việc
Phương án 1.
Thuốc thử chiết xuất được khuyến nghị: Bộ dụng cụ DNA/RNA tổng quát Macro & Micro-Test (HWTS-301)9-50, HWTS-3019-32, HWTS-3019-48, HWTS-3019-96) (có thể sử dụng với Máy chiết xuất axit nucleic tự động Macro & Micro-Test (HWTS-3006C, HWTS-3006B)) của Công ty TNHH Công nghệ Y tế Giang Tô Macro & Micro-Test. Thêm 200μL dung dịch muối sinh lý vào kết tủa thallus. Các bước tiếp theo nên tuân theo hướng dẫn chiết xuất, và thể tích dung dịch rửa giải được khuyến nghị là100μL.
Phương án 2.
Thuốc thử chiết xuất được khuyến nghị: Thuốc thử chiết xuất hoặc tinh chế axit nucleic (YDP302) của Tiangen Biotech (Bắc Kinh) Co., Ltd. Quá trình chiết xuất cần được bắt đầu theo đúng bước 2 của hướng dẫn sử dụng (thêm 200μL dung dịch đệm GA vào phần kết tủa tản nấm và lắc cho đến khi tản nấm được phân tán hoàn toàn). Sử dụng nước không chứa RNase/DNase để rửa giải, thể tích rửa giải được khuyến nghị là 100μL.
Phương án 3.
Thuốc thử chiết xuất được khuyến nghị: Thuốc thử giải phóng mẫu Macro & Micro-Test. Mẫu đờm cần được rửa bằng cách thêm 1mL dung dịch nước muối sinh lý vào phần kết tủa thallus đã xử lý như trên, ly tâm ở tốc độ 13000 vòng/phút trong 5 phút, và loại bỏ phần dịch nổi (giữ lại 10-20µL dịch nổi). Đối với khuẩn lạc thuần chủng và dịch ngoáy trực tràng, thêm trực tiếp 50µL thuốc thử giải phóng mẫu vào phần kết tủa thallus đã xử lý như trên, và các bước chiết xuất tiếp theo nên được thực hiện theo hướng dẫn sử dụng.
